安捷伦二维液相色谱助力维生素 D 测定第四法

安捷伦二维液相色谱精准助力应对 2020 版药典 0722 维生素 D 测定第四法

维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su) D 是(shi)(shi)人体所必(bi)须的(de)(de)(de)(de)(de)脂溶性(xing)维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)。维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su)D的(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)本作用是(shi)(shi)能(neng)(neng)促(cu)进钙和(he)磷的(de)(de)(de)(de)(de)吸收(shou)，缺乏(fa)(fa)维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su) D，会影响(xiang)钙的(de)(de)(de)(de)(de)吸收(shou)和(he)骨(gu)代谢(xie)，最终引(yin)起佝偻(lou)病、软骨(gu)症或(huo)骨(gu)质(zhi)疏松症等。作为药物的(de)(de)(de)(de)(de)维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su) D 相(xiang)关制剂是(shi)(shi)补(bu)充维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su) D 缺乏(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)最直接的(de)(de)(de)(de)(de)途径。准确测(ce)定维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su) D 及其(qi)前体的(de)(de)(de)(de)(de)含量，能(neng)(neng)够保(bao)证维(wei)(wei)(wei)生(sheng)(sheng)素(su)(su)(su)(su) D 达到目标的(de)(de)(de)(de)(de)效(xiao)价，从而保(bao)证药物的(de)(de)(de)(de)(de)有效(xiao)性(xing)和(he)安全(quan)性(xing)。

安捷伦(lun)二维液相色谱精准助力应对

 2020 版药典 0722 

维生素 D 测定第(di)四法(fa)

2020 版药典 0722 新(xin)增维生素 D 测(ce)定第(di)四法(fa)相(xiang)关背景

维(wei)(wei)生素(su) D 测定(ding)的难点在于(yu)含维(wei)(wei)生素(su) A 醇(chun)及其他相应脂溶性(xing)杂质的供试品，如维(wei)(wei)生素(su) AD 软胶囊、滴剂(ji)等，其基(ji)质中存(cun)在大(da)量(liang)油性(xing)辅料（大(da)豆油）和维(wei)(wei)生素(su) A 醇(chun)的干(gan)扰，同时(shi)维(wei)(wei)生素(su) D2/D3 含(han)量(liang)低（部分品种维生(sheng)素 D2/D3 含(han)量(liang)仅占 1‰ 左(zuo)右) ，加上维生(sheng)素 D 易受光热影(ying)响(xiang)产生(sheng)前(qian)维生(sheng)素 D（pre-vitamin D）、反式维生(sheng)素 D (Trans vitamin D)、速甾醇(chun)（tachysterol）和(he)(he)(he)光甾醇(chun)（lumisterol）等。对(dui)于本(ben)类样品，2015 版(ban)药典和(he)(he)(he) 2020 版(ban)药典的第二法和(he)(he)(he)第三法，通常需要将样品进行(xing)皂(zao)化、有机溶剂液(ye)液(ye)萃取，结合反相色谱(pu)系统(tong)(tong)净化，最后再采用正相色谱(pu)系统(tong)(tong)进行(xing)定(ding)量(liang)检(jian)测。方(fang)法测定(ding)结果的准(zhun)确性(xing)和(he)(he)(he)重(zhong)现性(xing)较难控制，也严重(zhong)影(ying)响(xiang)方(fang)法的分析效率。

 通过二(er)维柱切换的(de)液相色(se)谱技术不仅(jin)可(ke)(ke)以(yi)提升(sheng)系(xi)统分(fen)(fen)(fen)离能(neng)力，改(gai)善结构相似化(hua)合物(wu)的(de)分(fen)(fen)(fen)离分(fen)(fen)(fen)析；同时可(ke)(ke)以(yi)通过第(di)一维的(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)离去(qu)除(chu)样(yang)(yang)品(pin)(pin)基(ji)质中大量杂质成(cheng)分(fen)(fen)(fen)干(gan)扰(rao)，实现样(yang)(yang)品(pin)(pin)净化(hua)。因此(ci) 2020 版药典 0722 维生素(su) D 测定新增了第(di)四法(fa)即在线二(er)维液相色(se)谱法(fa)，方法(fa)第(di)一维和(he)第(di)二(er)维均采用正(zheng)相色(se)谱体系(xi)，其主要优点是样(yang)(yang)品(pin)(pin)可(ke)(ke)用正(zheng)己(ji)烷溶解(jie)后直接进样(yang)(yang)分(fen)(fen)(fen)析，且具有(you)载样(yang)(yang)量大，易(yi)去(qu)除(chu)非极(ji)性基(ji)质干(gan)扰(rao)成(cheng)分(fen)(fen)(fen)，同时维生素(su) D 与其他羟基(ji)化(hua)的(de)代谢物(wu)分(fen)(fen)(fen)离良好等优点。

安(an)捷伦的(de)应(ying)对(dui)方(fang)案

仪器系统(tong)的(de)基本搭配如(ru)图 1 所示，整(zheng)体上(shang)需要两套(tao)泵、一个两位六通切(qie)换阀、单或双紫外检测(ce)器组成。

主要色谱条件

色谱(pu)柱：

第一维：ChromCore VD-ChP4, 2.1*150mm，3μm（纳谱分(fen)析(xi)，货号S015-030012-02115S）；

第二维(wei)：Zorbax Silica, 3.0*100mm, 1.8μm（Agilent Technologies，货号 828975-301）；